8 de Octubre del 2014

8 de Octubre del 2014

TSI (Triple Azúcar Hierro)

El agar TSI es un medio diferencial que determina tanto la fermentación de los hidratos de carbono como la producción de ácido sulfihidrico. Las bacterias pueden utilizar cualquiera de los sustratos incorporados en el medio y ser metabolizados, características que son utilizadas para la diferenciación de estas, principalmente para las enterobacterias.

Este medio contiene lactosa en una concentración  de 1% y glucosa 0.1%, lo cual permite la observación de la fermentación de uno o de ambos carbohidratos por parte de las bacterias, ademas de la producción de gas y de ácido sulfhidrico. La fermentacion es un proceso que se lleva acabo en condiciones aerobicas (pico de flauta) y anaerobica (fondo). En el pico de flauta la glucosa (monosacarido) es catabolizada inicialmente por medio del ciclo anaerobico de Embden-Meyerhof, utilizado tanto por los aerobios como por los anaerobios para dar ácido pirúvico y posteriormente este sera degradado a traves del ciclo de Krebs para dar  CO₂, H₂O  y energia.

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables, el tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhidrico, el sulfato de hierro y amonio es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhidrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Extracto de carne	3.0	Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.
Pluripeptona	20.0
Cloruro de sodio	5.0
Lactosa	10.0
Sacarosa	10.0
Glucosa	1.0
Sulfato de hierro y amonio	0.2
Tiosulfato de sodio	0.2
Rojo de fenol	0.025
Agar	13.0
pH final: 7.3 ± 0.2

SIEMBRA

El medio se sirve en tubo de ensaye, y se realiza estrías por agotamiento,su incubacion se realiza  de 35-37ºC durante 24 hrs en aerobiosis.

RESULTADOS

1. Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.

2. Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.

3. Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azucares.

4. La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.

5. El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhidrico.

A: Reacción ácido (color amarillo).

K: Reacción alcalina ( color rojo-naranja).

A/A: Fermentación de los tres azucares (glucosa, lactosa y sacarosa).

K/A: Fermentación de la glucosa. 

K/K: No hay fermentación de la glucosa, lactosa ni sacarosa.

Precipitado negro: Formación de ácido sulfihidrico.

Burbujas: `Presencia de gas.